न्यूक्लिक एसिड पत्ता लगाउने प्रतिदीप्ति मात्रात्मक Ct मान - एक प्रेम-घृणा प्यारामिटर

"नयाँ कोरोनरी भाइरस निमोनिया निदान र उपचार कार्यक्रम (परीक्षण नवौं संस्करण)" ले न्यूक्लिक एसिड पत्ता लगाउने Ct मान ≥35 लाई अलगाव व्यवस्थापन वा डिस्चार्जको लागि एक महत्त्वपूर्ण आधारको रूपमा प्रयोग गर्दछ।त्यसोभए, न्यूक्लिक एसिड पत्ता लगाउने किटको Ct मान के प्रतिनिधित्व गर्दछ?के विभिन्न किटहरूको Ct मानहरू तुलना गर्न सकिन्छ?के Ct मान जति कम हुन्छ, किटको प्रदर्शन राम्रो हुन्छ?
Ct मान (थ्रेसहोल्ड साइकल, Ct) PCR चक्रहरूको संख्या हो जब वास्तविक-समय प्रतिदीप्ति मात्रात्मक प्रतिदीप्ति संकेतको तीव्रता सेट थ्रेसहोल्ड भन्दा बढी हुन्छ।न्यूक्लिक एसिड पत्ता लगाउने किटहरूले नयाँ मुकुटलाई उदाहरणको रूपमा लिन्छन्।ए र बी दुई भाइरस युक्त नमूनाहरू पत्ता लगाउन एउटै किटको एउटै प्रतिक्रियाको लागि, सीटी मानको साइजले निश्चित हदसम्म, भाइरल जीनको प्रतिलिपिहरूको संख्या, अर्थात् भाइरल लोडलाई प्रतिनिधित्व गर्दछ।नमूना B को Ct जति कम हुन्छ, उति नै उच्च भाइरल लोड हुन्छ।Ct मान भाइरल लोड र यसको संक्रामकताको विपरीत समानुपातिक छ।विभिन्न वास्तविक-समय फ्लोरोसेन्स परिमाणात्मक किटहरूको फाइदा र बेफाइदाहरू केवल Ct मानको साइजद्वारा न्याय गर्न सकिँदैन, किनभने विभिन्न किटहरूको Ct मानहरू तुलना गर्न सकिँदैन।किटको कार्यसम्पादन मूल्याङ्कनलाई संवेदनशीलता (न्यूनतम पत्ता लगाउने सीमा), विशिष्टता, सटीकता, स्थिरता, र निदानात्मक अनुप्रयोगका पक्षहरूबाट मापन गर्न आवश्यक छ।प्रत्येक अभिकर्मक निर्माताको आफ्नै अठारह प्रकारका मार्शल आर्टहरू छन्, र तिनीहरूसँग अनुप्रयोगमा आफ्नै जादुई शक्तिहरू छन्, त्यसैले म यहाँ विवरणहरूमा जाने छैन।
परम्परागत वास्तविक-समय मात्रात्मक PCR (QPCR) विश्लेषण उपकरण/प्रणालीहरूको लागि, Ct मानहरूको अधिग्रहण र रोगजनक पत्ता लगाउने अनुप्रयोगहरूमा तिनीहरूको व्यापक प्रयोग सबैलाई परिचित छ।उद्योगको विकास र प्रविधिको विकाससँगै, QPCR उपकरण र अभिकर्मकहरूले अवसर र चुनौतीहरूको सामना गरेका छन्।Yiou Think Tank (चीनको आनुवंशिक परीक्षण उद्योगमा २०२१ अनुसन्धान प्रतिवेदन: टेक्नोलोजी) ले मेरो देशको QPCR उद्योगका अधिकांश कम्पनीहरूले प्रविधिमा आधारित सामान्य समस्याहरूको सामना गरिरहेको विश्लेषण गरेको छ।यी समस्याहरूको प्रतिक्रियामा, समाधानहरू मुख्यतया दुई प्रकारमा विभाजित छन्: प्रविधि सुधारलाई गति दिने र नयाँ प्रविधिहरू प्रयोग गर्ने।
QPCR आणविक निदान को लागी POCT उद्योग को विकास दिशाहरु मध्ये एक हो, र प्रदर्शन को सुधार टेक्नोलोजी को आवेदन को गति को एक महत्वपूर्ण कारक हो।QPCR को एकल-नमूना थ्रुपुटको साथ POCT उपकरणहरूको लागि, R&D मा एकल प्रतिक्रियाको मुख्य प्यारामिटरको Ct मान कसरी अप्टिमाइज गर्ने?उही उपकरण, उही प्रतिक्रिया प्रणाली, र उही टेम्प्लेट एकाग्रता, सैद्धान्तिक रूपमा एकल प्रतिक्रियाको Ct मान जति ठूलो हुन्छ, प्रतिक्रियामा इन्जाइमको दक्षता कम हुन्छ।
इन्जाइम प्रतिक्रियाको दक्षता सुधार गर्ने र Ct मान अनुकूलन गर्ने प्रक्रियामा, एक विशिष्ट 40 PCR चक्र प्रतिदीप्ति मात्रात्मक प्रवर्धन वक्र पहिले विश्लेषण गर्न सकिन्छ।तलको चित्रमा रहेको एम्प्लीफिकेशन कर्भलाई प्रतिदीप्ति पृष्ठभूमि चरण, घातीय प्रवर्धन चरण, रेखीय चरण र पठार चरणमा विभाजन गरिएको छ।तल्लो फ्लोरोसेन्स पृष्ठभूमि प्राप्त गर्न, सम्भव भएसम्म यसलाई प्रारम्भिक घातीय प्रवर्धनको प्रतिदीप्ति मूल्यबाट छुट्याउन, प्रतिक्रिया उपभोग्य क्यारियर, प्राइमर प्रोब डिजाइन स्क्रीनिंग, र प्रतिक्रिया बफर प्रणालीबाट परीक्षण गर्न आवश्यक छ।घातीय प्रवर्धन अवधि इन्जाइम गतिविधिको सबैभन्दा प्रत्यक्ष प्रतिक्रिया हो, र यो POCT उपकरण, प्रतिक्रिया वाहक र अभिकर्मकहरूको सही समन्वयको प्रमाण पनि हो।यस समयमा, उपकरणको तापमान नियन्त्रण, अप्टिकल सिग्नल अधिग्रहण र विश्लेषण, क्यारियर बायोकम्प्याटिबिलिटी, र अभिकर्मकहरूको प्रणाली प्रदर्शन सबै पक्षहरूमा समायोजन र परीक्षण गर्न आवश्यक छ।अन्तमा, सम्पूर्ण एम्प्लीफिकेशन पूरा भयो, र उचित Ct मान प्राप्त गर्नका लागि परिणामहरू कठोर डाटा एल्गोरिथ्मद्वारा प्रस्तुत गरिनुपर्छ।

Ct मानको अप्टिमाइजेसनमा एउटा सानो कदम भनेको R&D कर्मीहरूको अनगिन्ती चरणहरू हो।दिनरातको चिन्ता र उत्साहमा हरेक पल “पहाड र खोला कतै देखिँदैनन्, विलो अँध्यारो र फूलहरू चम्किलो छन् र अर्को गाउँ छ”, जसले हामीलाई अगाडि बढ्ने साहस र जोश दिन्छ। फेरि।